LC梯度色譜儀分析中色譜峰展寬的柱外因素
LC梯度色譜儀分析中色譜峰展寬的柱外因素有進(jìn)樣器、檢測(cè)器和連接管中的死體積。采用細(xì)內(nèi)徑的管路,盡量減小連接管路的長度,采用死體積小的檢測(cè)器,采用合適的進(jìn)樣方式和技術(shù),可降低柱外效應(yīng)。
一、采用細(xì)內(nèi)徑的管路,盡量減小連接管路的長度。
若管路內(nèi)徑減小,其長度可增加。若管路內(nèi)徑增大,其長度要縮短。內(nèi)徑0.25mm連接管應(yīng)為100mm左右或更短。內(nèi)徑0.5mm連接管,長度應(yīng)在10mm以下。
連接管內(nèi)徑減小,管內(nèi)壓力降較大,泵壓會(huì)上升。
二、采用死體積小的檢測(cè)器。
一般檢測(cè)池內(nèi)色譜峰展寬小于總的色譜峰展寬的10%時(shí),要求檢測(cè)池體積小于14μL,一般為5~8μL。
三、LC梯度色譜儀采用合適的進(jìn)樣方式和技術(shù)。
進(jìn)樣有時(shí)是色譜峰展寬的主要原因,這取決于進(jìn)樣體積和進(jìn)樣方式。
進(jìn)樣體積越大,柱外效應(yīng)越大。
進(jìn)樣方式一般有閥進(jìn)樣與注射器進(jìn)樣兩種。閥進(jìn)樣允許進(jìn)樣體積大,注射進(jìn)樣允許進(jìn)樣體積小。進(jìn)樣體積還與溶質(zhì)k值有關(guān),溶質(zhì)k值越大,允許進(jìn)樣的體積越大。
LC梯度色譜儀不分流進(jìn)樣時(shí),在氣化室中氣化的含有大量溶劑的樣品不可能瞬間進(jìn)入毛細(xì)管柱,溶劑峰會(huì)嚴(yán)重拖尾,使早流出組分的色譜峰被掩蓋在溶劑拖尾峰中,從而使分析變得困難甚至不可能。這種由于進(jìn)樣時(shí)間延長引起的色譜峰展寬稱為時(shí)間性譜帶展寬。時(shí)間性譜帶展寬可采用溶劑效應(yīng)和熱濃縮來抑制。
所謂溶劑效應(yīng)是指進(jìn)祥時(shí)柱溫比溶劑沸點(diǎn)低15~30℃,當(dāng)不分流進(jìn)樣完畢后,打開分流閥,用載氣吹掃氣化室中殘留的溶質(zhì)和溶劑,同時(shí)柱溫開始升高,溶劑開始蒸發(fā),溶質(zhì)以窄的起始譜帶開始進(jìn)行分離的過程。
LC梯度色譜儀所謂熱濃縮是指進(jìn)樣時(shí)柱溫比溶質(zhì)沸點(diǎn)低很多,使溶質(zhì)冷凝在柱頭上,同時(shí)柱溫比溶劑沸點(diǎn)高很多,使溶劑保留為氣態(tài)的過程。在此條件下不會(huì)出現(xiàn)溶劑效應(yīng)。如果柱溫比溶質(zhì)沸點(diǎn)低150℃以上,熱濃縮會(huì)有效地把溶質(zhì)濃縮到很窄的區(qū)帶上。